1. PRV 变异株疫苗候选毒株的筛选：从广东省内猪场分离了 6 株 PRV 毒株，经过 PRV 的 gB、gC、gD、gE 基因的 PCR 扩 增与测序分析，序列分析结果表明分离的 6 株均为 PRV 变异株，小鼠致病性试验、免疫原 性和生物信息学分析表明其中的 WH 株毒力最强，将此毒株作为候选毒株进行基因缺失株 的构建。WH 株对仔猪的致病性实验结果表明仔猪的 LD50 为 105.8 TCID50 / mL。 2. 构建 PRV 基因缺失株：通过构建同源双臂同源重组方法筛选获得了 PRV 变异株 WH 株 gI/gE 双基因缺失株， 命名为 WH-ΔgI/gE，经过连续传代证明双基因缺失株有较好的稳定性与细胞适应性，其第 5 代病毒在 BHK-21 细胞上的滴度为 108.1 TCID50 / mL。 3. 制备 PRV 基因缺失株灭活疫苗： 建立了PK5细胞的悬浮培养细胞了，培养 WH-ΔgI/gE 并进行 TCID50测定，然后加入 0.3%的甲醛溶液灭活 24h，灭活后取 适量接种 BHK-21 细胞，连续观察 4d 无 CPE 出现，表明灭活完全。 4、PRV 基因缺失株灭活疫苗免疫效果评估 将不同浓度的灭活疫苗及 2 种不同佐剂混合乳化分别免疫 4 周龄仔猪，间隔 2 周同剂量 加强免疫 1 次，2 周后以 10*LD50 的 PRV 对免疫动物攻毒，通过血清抗体中和指数和攻毒 保护试验对候选疫苗毒株免疫原性和保护力进行评价，结果表明免疫的仔猪获得 100%的保 护，而对照未免疫组全部地病死亡。